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PVDF印記膜技術(shù)交流 純客戶角度出發(fā),公司不做任何修改和評論
更新時間:2013-11-12   點(diǎn)擊次數(shù):2444次

PVDF膜
    剛開始做WB的人也許會有這種疑問:為什么實(shí)驗(yàn)室的老師(或者師兄師姐們)在教我們做WB的時候,如果是用PVDF膜做,總是小心翼翼的剪,節(jié)省著用,甚至一些邊邊角角也舍不得丟掉呢?其實(shí),這不僅是因?yàn)镻VDF膜比較貴,還由于PVDF膜是做WB的“*”。

    聚偏二氟乙烯(PVDF)膜作為基質(zhì)的轉(zhuǎn)印膜由Millipore公司在1985年首先推出。與硝酸纖維素膜相比,PVDF膜在蛋白質(zhì)截留能力,機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)相容性上都更*的性能(Pluskal,et al.,1986)。市售硝酸纖維素膜的典型結(jié)合量是80-100μg/cm2,而PVDF膜結(jié)合量是100-200μg/cm2(而結(jié)合強(qiáng)度PVDF比硝纖膜強(qiáng)6倍!)。在艾滋病毒(HIV)血清學(xué)檢驗(yàn)中直接比較PVDF和硝酸纖維素膜,PVDF膜具有更好的截留總HIV抗原能力并提高抗體檢測糖基化被膜抗原的性能。但是PVDF膜zui大的優(yōu)點(diǎn)不僅于此:更好的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)耐受性使PVDF膜在各種染色應(yīng)用和多重免疫檢測中成為理想選擇;而且單個凝膠的泳道復(fù)本可用于多種目的,如考馬斯亮藍(lán)染色后切出條帶并進(jìn)行N-末端測序、蛋白消化/肽分離/內(nèi)部測序和免疫檢測(Kurien,et al.,2003)。特別是需要做N端蛋白測序,在相當(dāng)“嚴(yán)酷”的清洗條件下,當(dāng)尼龍或者硝纖膜已經(jīng)降解的情況下PVDF膜依然保持本色,笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白測序的*選擇。此外,個人經(jīng)驗(yàn),一些強(qiáng)疏水蛋白用PVDF膜效果會更好一些。PVDF膜適用的檢測方法也不少,化學(xué)發(fā)光、常規(guī)顯色、同位素和標(biāo)準(zhǔn)染色都一樣OK,但不適合熒光。PVDF膜特別注意的是需要100%甲醇預(yù)處理(不超過15秒)再用緩沖液平衡,才能用,而且適用過程中萬一干了也要同樣程序再處理(不過要真出現(xiàn)這種問題也是自己欠扁,誰要你不小心呢,轉(zhuǎn)膜前處理也就罷了,轉(zhuǎn)膜后再這樣處理可能會影響后繼的抗體識別呢)。PVDF膜同樣分0.45um和0.2um的,后者孔徑小,對小分子蛋白有較好的攔截吸附,背景可能會比前者稍高。

PVDF膜常見的有以下幾個品牌

公司

產(chǎn)品名

孔徑

適用范圍

參考價格

Millipore

Immobilon Transfer Membranes

0.45um 0.2um

 

2050.00

Bio-Rad

Immun-Blot PVDF Membrane

 

Chemiluminescent, colorimetric western blots, amino-terminal sequence and total amino acid composition

 

Pierce

PVDF Membrane

0.45um 0.2um

Western, Southern, Northern, and dot blots

 

Pall Life Science

BioTrace PVDF Transfer Membrane

0.45um

Nucleic acid and protein transfers. Protein sequencing

2200.00

Invitrogen

PVDF Membrane

0.45um
0.2um

Protein sequencing, immunoblotting

 

Whatman

Westran Clear Signal PVDF Membrane

0.45um

Western blots

 

    作為PVDF膜的*,Millipore公司的PVDF膜Immobilon系列分為Immobilon-P(0.45um), -PSQ(0.2um), -FL(用于熒光顯色)和Blotting Sandwiches for High Troughput四種。Immobilon-P膜孔徑均一,具有*的吸附能力,染色性能好、抗溶劑能力強(qiáng)和信噪比高,有助于提高檢測靈敏度,而且開放的孔結(jié)構(gòu)容易接近被吸附的蛋白質(zhì),并有助于去除背景上沒有吸附的探針,可以說是免疫印跡檢測理想的印跡膜。Immobilon-PSQ轉(zhuǎn)印膜是印跡小分子蛋白質(zhì)(<20KDa)的理想選擇——優(yōu)良的蛋白質(zhì)吸附性能,滲漏少。內(nèi)表面面積較大,可供蛋白質(zhì)吸附從而提高蛋白質(zhì)測序的得率。由于不含污染性支撐物或表面活性劑,Immobilon-PSQ層析譜上的背景峰值極小。Immobilon-FL也是Millipore值得驕傲的產(chǎn)品,因?yàn)檫@是*個專門為熒光顯色優(yōu)化的轉(zhuǎn)移膜。通過實(shí)驗(yàn)證明,這種膜在Kodak成像系統(tǒng)可以顯示僅7ng的蛋白,聽起來不錯吧,有興趣可以試一試。這幾種膜除了一般的PVDF膜的優(yōu)點(diǎn)之外,zui大特點(diǎn)就是一個字——快。按照Millipore的操作手冊,Immobilon可以在保證質(zhì)量的前提下縮短WB時間到2個小時——主要是縮短封閉和洗脫時間。這可真是個好消息,因?yàn)樽谀莾旱萕B結(jié)果多浪費(fèi)時間啊!縮短這個費(fèi)時而枯燥的過程,早出結(jié)果,可以提高實(shí)驗(yàn)效率,利于我們分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果,考慮下步對策嘛。卷膜經(jīng)濟(jì)實(shí)惠,裁剪剩下的邊角料還可以用來做點(diǎn)雜交,而預(yù)裁剪的即用膜更適合高通量等等“用金錢換時間”的實(shí)驗(yàn)。再次強(qiáng)調(diào)的是,疏水PVDF膜在用前必須經(jīng)過50%或以上體積比的甲醇或者乙醇溶液處理幾分鐘,待膜變成半透明后用MilliQ水或者純水漂洗一下,轉(zhuǎn)入電泳緩沖液平衡才能用。

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